TUNEL法,全称Terminal deoxynucleotidyl Transferase dUTP Nick End Labeling,是一种用于检测细胞凋亡的技术。其基本原理是利用脱氧核糖核酸末端转移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase,TdT)催化荧光素或生物素标记的dUTP与DNA断裂产生的3'-OH末端连接,形成新的DNA片段,然后通过荧光显微镜或流式细胞仪等方法进行检测。
具体步骤如下:
1. 制备样本:首先需要将待检测的组织或细胞固定在载玻片上,并进行一系列的预处理,包括脱钙、脱脂、水化等。
2. 酶反应:将处理好的样本放入含有TdT和荧光素或生物素标记的dUTP的反应液中,进行酶反应。在这个过程中,TdT会催化dUTP与DNA断裂产生的3'-OH末端连接,形成新的DNA片段。
3. 洗涤:酶反应完成后,需要用洗涤液将未结合的dUTP和TdT洗掉。
4. 检测:最后,可以通过荧光显微镜或流式细胞仪等方法进行检测。如果样本中的细胞发生了凋亡,那么就会在细胞核中看到明亮的荧光信号。
TUNEL法的优点是灵敏度高,特异性强,可以定量分析细胞凋亡的程度。但是,它不能区分细胞凋亡和坏死,也不能确定细胞凋亡的具体原因。